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甘油试剂盒的样本处理相关信息

 
样本处理
酒类、饮品、清澈体液样本:甘油试剂盒直接测定,如超过线性范围用蒸馏水或生理盐水稀释后测定。
培养液:取不含酚红无颜色无血清的细胞培养基液,如有细胞碎片应4ºC12,000g离心5min清除,取上清测定。
血液:新鲜抗凝血4ºC 2000 g5 min得到血浆。或非抗凝血4ºC2小时得到血清。2000g10min除去血细胞。70 ºC10min灭活内源性脂蛋白脂肪酶,再次12,000g10min,取上清测定或-20 ºC保存。
 
配制工作溶液:按4:1比例,取4ml试剂R1与1ml试剂R2混合即可,立即使用或4 ºC保存<1天,变色弃去。
 
标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1,000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中4-6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
 
甘油测定
参见下表加样。先加标准甘油或待测样品,甘油试剂盒后加工作溶液。甘油浓度很低时,可尝试样品与工作液体积100:100ul能否进一步增加灵敏度,但样品超过100ul将稀释酶浓度而降低灵敏度。超出线性范围可适当稀释,根据实际稀释倍数计算浓度。
37ºC 20 min(15-30mim)。或25ºC室温反应30min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60min内稳定。
先用蒸馏水空白管调零,然后测定各管OD值。
绘制标准曲线并计算甘油浓度。Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择“散点图”,点击“完成”。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击“添加趋势线”,点击“选项”,点击“显示公式”和“R2  值”。

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